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发布时间:2020-06-30 07:58:39
大肠菌群检验方法
***标准采用三步法,即:乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。 乳糖发酵试验:样品稀释后,选择三个稀释度,每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h,观察是否产气。
分离培养:将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上,36±1℃培养18-24h,观察菌落形态。
证实试验:挑取平板上的ke疑菌落,进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h,观察产气情况。
报告:根据证实为大肠***阳性的管数,查MPN表,报告每100ml(g)大肠菌群的MPN值。
所谓大肠菌群,是指在37℃培养24h 内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革蓝氏阴性无芽孢***的总称。主要由肠***科中四个属内的***组成,即埃希氏***属、柠檬酸***属、克雷伯氏菌属和肠***属。
水的大肠菌群数是指100 mL水检样内含有的大肠菌群实际数值,以大肠菌群近似数(MPN)表示。在正常情况下,肠道中主要有大肠菌群、粪链球菌和厌氧芽孢***等多种***。这些***都可以随人畜排泄物进入水源,由于大肠菌群在肠道内数量多,所以,水源中大肠菌群的数量,是直接反映水源被人畜排泄物污染的一项重要指标。目前,国际上已公认大肠菌群是粪便污染的指标。因而对饮用水必须进行大肠菌群的检查。
水中大肠菌群的检测方法,常用多管发酵法和滤膜法。多管发酵法可适用于各种水样的检验,但操作繁琐,需要的时间较长。滤膜法仅适用于自来水和深井水,操作简单、快速,但不适用于杂质较多、易于堵塞滤孔的水样。
怎样检测饮用水中的大肠菌群?
(一)水样的采集
自来水取样:应在水龙头打开放水5分钟,再用无菌容器接取水样,待分析。如水样内含有余氯,则采样瓶灭菌后按每五百毫升水样加百分之三Na2S2O3.5H2O溶液一毫升。
(二)初发酵试验
1.水样稀释:制备水样10-1、10-2的稀释液,方法为用无菌移液管吸取水样10mL放于盛有90mL无菌水和若干玻璃珠的锥形瓶中,充分振荡使混合均匀,并使其中的***尽量呈单个存在,即为10-1稀释液;再从10-1制备10-2稀释液
2.接种和培养:以无菌操作于5支三倍浓缩培养基中各加入水样10mL,5支普通培养基试管中加入水样1mL,5支普通培养基试管中加入10-1稀释液1mL,小心混匀放入37℃培养箱中培养24h。此即5管法。
3.结果观察:37℃中培养24h后取出观察,观察有无气体和酸产生。在48h之间,培养管内倒置的杜汉氏小管内有任何量的气体积累,或培养基颜色从紫色变为***,便可初步断定为阳性反应。
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